酶的切割位點如何描述
『壹』 高中生物問題 限制酶的切割位點一定在識別序列內部 這句話正確嗎
不正確,可以再識別序列的外邊緣
如GGTT↓
CCAAG
第一句對,因為酶具有特異性
第二句對,因為粘性末端決定於限制酶怎麼切,不同的酶可以切出相同的末端,只是這末端所在的序列不一樣
第三句錯,還可以有平末端
『貳』 質粒上有多個限制酶的切割位點,這句話怎麼理解
意思很明確啊 人為的插入了很多酶切位點
『叄』 RNA聚合酶的切割位點在哪
RNA 聚合酶沒有切割位點
限制酶有切割位點,在磷酸二酯鍵
『肆』 smal限制酶切割位點
(1)質粒上含有兩個SmaⅠ限制酶的切割位點,所以用SmaⅠ限制酶處理圖甲所示的質粒會得到2個DNA片段;圖乙所示的外源DNA含有一個AluⅠ限制酶的切割位點,所以用AluⅠ處理外源DNA會形成兩個黏性末端,增加2個游離的磷酸基團.
(2)外源DNA含有四個酶切位點,即SmaⅠ、AluⅠ、PstⅠ和HindⅢ酶,其中AluⅠ酶的切割位點位於目的基因上,所以不能用此酶切割;用SmaⅠ酶切割會將質粒上兩個標記基因均破壞,所以不能用SmaⅠ酶切割;應選用 PstⅠ和HindⅢ酶同時酶切質粒和含目的基因的外源DNA,這樣可以避免目的基因和質粒在酶切後產生的片段發生自身環化或任意連接,也便於篩選需要.如果是用PCR技術擴增目的基因,設計引物是關鍵,但在擴增時退火溫度一般為55~60℃,對於(A+T)%>50%,一般用55℃;(A+T)%≤50%時一般用60℃,原因是G與C之間是三個氫鍵,所以C和G比例越高,DNA越穩定.
(3)用 PstⅠ和HindⅢ酶同時酶切質粒,會破壞氨苄青黴素抗性基因,但沒有破壞四環素抗性基因,所以導入重組質粒的大腸桿菌能抗四環素,但不能抗癌變青黴素.為了篩選獲得含有重組質粒的大腸桿菌,首先將經轉化處理過的大腸桿菌接種在含四環素的培養基中,然後用影印法將該培養基上的菌落按原來的方向印在含氯黴素培養基上,以篩選獲得含重組質粒的細菌.在含四環素培養基中能生長繁殖,而在含氯黴素培養基中不能生長繁殖的是導入了重組質粒的大腸桿菌.
(4)因為大腸桿菌細胞內缺乏內質網與高爾基體,不能對多肽鏈進行折疊、組裝與修飾,所以在上述導入了重組質粒的大腸桿菌菌株中,目的基因正常轉錄形成了mRNA,但其所控制合成的蛋白質卻並不具有生物活性.
故答案為:
(1)22
(2)PstⅠ和HindⅢ酶G與C(之間是三個氫鍵)比例越高越穩定
(3)四環素氯黴素重組質粒(或目的基因)
(4)大腸桿菌細胞內缺乏內質網與高爾基體(或大腸桿菌缺乏生物膜系統),不能對多肽鏈進行折疊、組裝與修飾
『伍』 如何確定酶切位點
酶切位點是在引物上加入的。注意添加酶切位點的時候要在引物5'端加入,3'端要保證至少12個鹼基的完全配對區域。
『陸』 怎麼分析酶切位點
酶切位點(Restriction Enzyme cutting site):DNA上一段鹼基的特定序列,限制性內切酶能夠識別出這個序列並在此將DNA序列切專成兩屬段。
可能存在同尾酶,不同酶的識別序列不同,
有的可能能識別多個酶切位點比如STY1識別序列有WW
『柒』 什麼叫限制酶切割位點
基因工程中的構建基因表達載體需用到限制酶和DNA連接酶,限制酶會內識別限制酶切容割位點(即某個DNA序列,如AACC--TTGG,當然,不同的限制酶作用位點不一),限制酶能將磷酸二酯鍵切斷,不是隨便切斷,而是特定的。
『捌』 如何給一段序列增加一個酶切位點。
你可以設計帶有酶切位點的引物,對目的基因進行PCR,就可在目的基因上引入酶切專位點。
步驟:引屬物設計(藉助軟體)——合成引物(公司合成)——PCR。
最重要的一個儀器就是PCR儀了,具體的加什麼試劑,加多少,我想樓主應該是做分子生物學,這些應該挺清楚的了。
樓主,引物一般是用軟體設計,例如Primer.5,你根據你的目的基因兩端的特點,設計合適的引物,然後在引物上再添加酶切位點
,例如EcoRⅠ
是應用最廣泛的限制性內切酶,酶切位點和切割位點如下:
5'
G↓AATTC
3'
3'
CTTAA↑G
5'
,你就可以在這兩條引物上分別添加這幾個脫氧核苷酸,這不就在引物中引入酶切位點了嗎?經過PCR後引物和目的基因連在一起,酶切位點自然也連上去了。樓主,你可以根據需要,引入不同的限制性內切酶的酶切位點。
『玖』 不同限制酶切割dna的位點不同
AC、一種限制酶能識別一種特定的核苷酸序列,並能在特殊位點切割DNA分子,專A正確,C錯誤,D正確;
B、同一種限屬制酶切割不同的DNA產生的黏性末端相同,能夠很好地進行鹼基配對,B正確.
故選:C.
『拾』 如何查找酶切位點
用這個吧:
http://www.bio-soft.net/sms/index.html