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為什麼用同一種限制酶切割目的基因和質粒

發布時間: 2021-03-14 00:54:20

① .不同的限制酶切割目的基因和質粒有什麼優點為什麼一般選用大腸桿菌作為受體

一般會使用相同的兩個限制性核酸內切酶對目的基因和載體進行切割專,使它們產生相同的屬末端,可以在T4 dna 連接酶的作用下,進行連接反應,構建重組質粒。
一般在構建重組質粒的時候都會先用大腸桿菌做克隆,因為大腸桿菌的步驟簡單,培養方便,提取質粒方便。
望採納

② 為什麼必須使用同一種限制酶對載體和目的基因進行切割

不是同一種
是同種
用A和B限制酶切割載體,用C和D切目的基因
要求A=C或D,B=D或C,這是教科書的意思
你的理解是A=B=C=D

③ 為何基因工程中,載體和目的基因要用同一種限制酶切割。既然這樣,那為什麼為了防止粘性末端亂連接,要

什麼時候要用兩種限制酶切了?把目的基因與載體切好後,聚合,會有目的-目的、載體-載體、目的-載體的基因,要的是目的載體的那一部分,然後就需要標記基因了

④ 目的基因和質粒為什麼要用一種限制酶切割限制酶和DNA連接酶作用的位點相同么

1.只有這樣才能保證切得是同一位點
2.一樣

⑤ 為什麼用同一種限制酶處理質粒和外源DNA形成方式很多

為什麼用同一種限制酶處理質粒和外源DNA形成方式很多
(1)質粒切割前是雙鏈環狀DNA分子,所有磷酸基團參與形成磷酸二酯鍵,故不含游離的磷酸基團.從圖1可以看出,質粒上只含有一個SmaⅠ的切點,因此被改酶切割後,質粒變為線性雙鏈DNA分子,因每條鏈上含有一個游離的磷酸基團,因此切割後含有兩個游離的磷酸基團.
(2)DNA分子的一條多核苷酸鏈中,兩個脫氧核苷酸之間以磷酸基團和五碳糖相連.由題目可知,SmaⅠ識別的DNA序列只有G和C.
(3)用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒來重組質粒,其結果是目的基因與抗性基因被破壞.
(4)將游離末端重新結合形成DNA使用的是連接酶,獲得的環狀DNA可能有:原質粒切割的粘性末端重新連接;目的基因的粘性末端連接而成環狀;目的基因與切割質粒形成重組質粒.
(5)如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒,比用EcoRⅠ酶切割的優點是:避免切割的外源DNA、質粒的粘性末端自身環化.
(6)導入重組質粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養基上生存,因此為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌,一般需要用添加抗生素的培養基培養.

⑥ 高中生物 為何用相同限制酶切割目的基因和質粒

這樣可以使切割後的目的基因與質粒連接上

⑦ 為什麼必須使用同一種限制酶對載體和目的基因進行切割

為了產生相同黏性末端

⑧ 為什麼同種限制酶切割形成的末端相同時目的基因與質粒會反向連接,為什麼會有反向連接這種情況。目的基因

限制酶的識別位點大多是反向對稱的,如果只用用同種酶切,所得片段的2端序列相同,在連接時,是隨機連接,不僅會出現反向連接,而且會出現片段串聯。

在分子克隆實驗中,我們會用兩種酶分別切目的基因和質粒的上下游,這樣就保證了目的片段和質粒片段在連接時的方向性,如上游都用EcoR I,下游都用BamH。

你所理解的「目的基因與質粒不就是本應該用同一種限制酶切割」,指的就是兩者上游同用一種,下游又同用另一種,而不是指上下游都用同一種酶切。

除非是某些特殊情況,不得不用一種酶切上下游,這樣會出現大量的反向連接,連接後,需要多挑些克隆鑒定。

個人見解,僅供參考,祝好!

⑨ 為什麼要兩種酶才能切割基因(兩端要不同的限制酶),不能是同一種嗎

切割目的基因時同種序列當然可以用同種限制酶切割;但有時也用不同種的限制性酶專割。屬
用不同限制酶切割的目的是:保證目的基因和質粒(運載體)的准確連接,避免無效連接(如:目的基因—目的基因連接物、質粒自身環化等)過多。可以用不同限制酶切割相同序列的原理:
雖然一種限制酶只能識別一種特定的氨基酸序列,但兩種限制酶識別的序列可以相包含,例:酶A識別GGATCC序列,酶B識別GATC序列,則GGATCC序列就可以被兩種限制酶切割。哪裡不明白請追問,滿意請採納,希望對你有幫助~

⑩ 既然用同一種限制酶切割載體和目的基因會發生自連 為什麼還要這么做

不是同一種
是同種
用A和B限制酶切割載體,用C和D切目的基因
要求A=C或D,B=D或C,這是教科書的意思
你的理解是A=B=C=D

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