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察氏培養基需要什麼儀器

發布時間: 2021-03-03 02:03:31

⑴ 察氏培養基主要作用是什麼

該培養基主要用於真菌的培養。
常用於青黴,麴黴鑒定及保存菌種用。

另外為了防止雜菌生長,時常在該培養基內加入高濃度的氯化鈉,以抑制非真菌的生長,此時稱之為高鹽察氏培養基。

⑵ 察氏培養基

察氏培養基配方,這是廣東環凱的,配方(每升):
硝酸鈉專 3g
屬磷酸氫二鉀 1g
硫酸鎂 0.5g
氯化鉀 0.5g
硫酸亞鐵 0.01g
蔗糖 30g
瓊脂 15g
最終pH 7.3±0.2

⑶ 察氏培養基不用蒸餾水可以嗎

不用蒸餾水的話,可能會有其他雜質或菌類

⑷ 葯用真菌培育的一般設備和基本操作技術是什麼

(冉硯珠)

葯用真菌培育的基本設備及操作技術和一般微生物培養相同。

一、一般設備

(一)無菌室(接種室)

這是進行無菌操作的場所,無菌室要求嚴密,一般以4—5m2大小為宜,四壁最好塗以白漆,室內要整齊、干凈,不要有對流空氣,室內要安裝滅菌用的紫外光燈和照明用的日光燈,並設有操作台和凳子,在無菌室門外最好再有小一倍的緩沖間,以防外面的空氣襲入無菌室,二者的門不要對開,以左右的推拉門為好,這種無菌室一般設立在距菌室很近的菌種培養室的旁邊。

(二)無菌箱

無菌箱也稱接種箱(櫃),是一木製架玻璃櫃,是代替無菌室的。在箱內的兩側設有能滑動啟閉的活門,在箱的前側底上部有兩個圓形手孔,以便接種時把手伸入進行操作。在箱內上壁最好按一支紫外光燈和日光燈管。無菌箱的邊角應嚴密,不得有縫隙,以免雜菌侵入。

無菌室和無菌箱在使用前必須經過殺菌。

(三)超凈工作台

這也是進行無菌操作的裝置,有各種型號和規格,有的適合單人操作,有的適合雙人操作。它可以設置在無菌室或一般的房間中,但要求所處的環境空氣流動較小、乾燥、塵埃稀少,最好不要有人來回走動。這種裝置在目前微生物和組織培養研究工作中普遍應用。

(四)殺菌設備

須有高壓蒸汽滅菌鍋,條件不足,亦可用蒸鍋代替。主要用於培養基及玻璃器皿滅菌時使用。

(五)溫箱和培養室

用於保溫培養。根據不同目的選用不同設備。一般葯用真菌母種的培養在溫箱內進行,而子實體的培養就需要利用培養室。長子實體階段,空氣濕度要高,故培養室最好是水泥池,有水源並有下水道和通風換氣的條件。此外設瓶架,備照明燈以及溫、濕度計等。

(六)乾燥設備

烤箱、烤房等。

(七)常用的玻璃器皿

1.試管

用於培養斜面菌種。常用為180×20mm及150×15mm兩種。

2.三角瓶

有100ml、500ml、1000ml及5000ml等規格。用於裝無菌水和培養基。

3.培養皿

供平面培養用。常用的為直徑9cm培養皿。

4.吸管

用於稀釋分離菌種。有1ml和10ml。

5.玻璃漏斗

用於過濾和分裝培養基用。

6.酒精燈

用於接種工具的火焰滅菌。

7.其它用品

尚需紗布、棉花、鑷子、剪刀、線繩、試管架、天平、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。

如開展深層發酵,除上述設備外,尚需有搖瓶機、種子罐、發酵罐、過濾用的板框或離心機以及其它有關設備。

二、基本操作技術

(一)玻璃器皿的准備和清潔

玻璃器皿的清潔與否直接影響實驗結果,在使用前均需洗刷干凈或再經滅菌、晾乾或烘乾後備用。新購買的玻璃器皿都有游離的鹼性物質,最好的洗滌辦法是用1%的HC1溶液處理一次,再用清水洗凈。

1.重鉻酸鉀洗滌液的配製

濃配法:

重鉻酸鉀(工業用) 40g

濃硫酸(工業用) 800ml

自來水 160ml

稀配法:

重鉻酸鉀(工業用) 50g

濃硫酸(工業用) 100ml

自來水 250ml

將重鉻酸鉀溶解在水中,慢慢加入濃硫酸,邊加邊攪動(注意不可將重鉻酸鉀溶液往濃硫酸里傾倒,以免燒傷)。配好後貯存於廣口瓶內,蓋緊塞子備用。應用此液時,器皿必須乾燥,同時應注意不要把大量還原物質帶入。配好的溶液呈紅色,濃厚並有紅色小結晶。

2.各種玻璃器皿的洗滌

染菌或盛有葯用真菌的器皿,先放入高壓鍋內滅菌20—30分鍾,趁熱倒出培養物再用熱肥皂水洗刷並沖洗干凈。以瓶壁不掛水珠為准。

含有凡士林和蠟的器皿,需要預先除去油膩,必要時在5%蘇打液內煮後再用熱肥皂水洗刷。若作精密的試驗或裝化學葯品時,則先用洗滌液浸泡,自來水、蒸餾水沖洗後烘乾備用。

帶菌的移液管,應立即投入5%石炭酸溶液滅菌一天,再用自來水沖洗。

新的載玻片和蓋玻片,先浸於肥皂水(或鹽酸酒精)內1小時,用水沖洗後軟布擦乾保存於95%酒精中。

(二)培養基的配製

培養基是根據葯用真菌生長繁殖所需要的各種營養物質用人工配製的機質。其中除含有水分、碳水化合物,含氮化合物和少量無機鹽類外,有時還需要各種必要的維生素。

碳源是葯用真菌的重要營養來源,它不但是合成碳水化合物及氨基酸的重要成分,而且也是生命活動的能量來源。

氮素是合成蛋白質及核酸的重要原料,葯用真菌生長發育的不同階段,對碳氮比例的要求是不同的。在營養生長階段,要求碳氮比為20∶1左右;在生殖生長階段,則要求碳氮比為30∶1—40∶1。不同的葯用真菌,對碳氮比的要求也各有不同。決定碳氮比因素有兩個:一是細胞內成分的碳氮比,二是決定於真菌的不同種類對碳氮元素的同化能力。

某些無機鹽如鉀、鈉、鈣、鎂等磷酸鹽和硫酸鹽,雖然需要量很少,但也有助於葯用真菌的生長發育。硫胺素(維生素B1)是碳代謝中轉羧酶的重要成分,因此在配製培養基時,必須考慮到葯用真菌的營養要求。

培養基的種類很多,凡利用含有豐富營養的天然有機物質製成的培養基稱為天然培養基,如馬鈴薯、麩皮、豆餅粉等。利用已知成分和數量的化學葯品配製的培養基為合成培養基,如察氏培養基。但一般是採用一部分天然物質作為碳源、氮源及生長因素的來源,再適當添加一些無機鹽類,稱為半合成培養基,例如去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀1.5g,硫酸鎂0.75g;維生素B110mg,瓊脂18g,水1000ml。

培養基除了滿足葯用真菌的營養條件外,還要注意調節適宜的酸鹼度。一般常用的培養基有固體及液體兩種。

(三)消毒滅菌

為了分離得到所需要的葯用真菌,並進行純培養,所用的器皿及培養基都必須嚴格的消毒滅菌,殺死其中的微生物。

1.乾熱滅菌

主要在烤箱中進行。適合於玻璃器皿如吸管、培養皿、試管、三角瓶等,滅菌前器皿必須用紙包裝好,溫度慢慢上升,要求控制在160℃,保持1小時即可。滅菌後待溫度下降至60℃以下方可取出物品,以免溫度突然下降造成器皿的炸裂。

2.濕熱滅菌

由於濕熱的穿透力比乾熱的穿透力強,所以含有水分的培養基就採用這種方法。一般液體及瓊脂培養基只要15磅壓力半個小時,而鋸木屑培養基則消毒時間延長1倍。

3.土法滅菌

是用蒸汽鍋(或普通鍋)蒸。這一般在沒有高壓滅菌條件或在高壓滅菌破壞培養基的情況下採用。溫度只能達100℃左右,為了達到徹底滅菌的目的,一般要進行三次間歇滅菌,每次圓氣後保持1小時,然後室溫下放置一天,第二天及第三天再各蒸一次。

4.葯物滅菌

常用的有70%酒精,0.1%升汞水,10%漂白粉,40%甲醛溶液以及新潔爾滅等。

此外還有火焰滅菌及紫外線滅菌。

(四)接種與培養

空氣中雜菌微生物較多,這對葯用真菌的純培養是有害的,接種工作必須在無菌條件下進行。

1.斜面接種

接種時,把待接種用的試管斜面培養基和原菌種並列放在左手中,使中指夾於兩試管之間,斜面朝上便於觀看,右手拿接種針,蘸酒精在火焰上灼燒片刻(接種針進入試管的部分均要燒到),用右手小指、無名指和手掌拔掉試管棉塞,以火焰微微烤管口一周,使管口可能沾污的雜菌被燒死,這時接種針通過火焰伸入菌種管內稍冷卻挑取少許菌絲連同培養基一起,迅速轉入待接種的試管內,放在斜面的中央處,以利菌絲向四周生長延伸,注意不要使菌種沾靠管壁,然後將棉塞塞好,這就完成了第一管的接種程序。每管接種均如上述。一般每支原菌種管可擴接20支新管,放在恆溫箱或恆溫室培養。

2.液體接種

就是把菌種從斜面培養基上轉接到液體培養基中,再放到適宜條件下振盪培養。接種方法基本同前,伹菌種管可以安置在菌種架上,按一定角度旋緊螺旋,三角瓶略向上斜以免基液流出,將取有菌種的接種小鏟送入液體培養基時,用鏟的背面在瓶壁靠近培養液處壓碎菌塊並投入液體中,同樣塞上棉塞及灼燒接種工具。每管菌種可接2—3瓶培養液。

如菌種為液體時,常用無菌移液管接種,接種量為10%,接種後放於恆溫培養室的搖床上振盪培養。

三、室外作業的一般工具及操作

室外栽培多指段木栽培,一般利用的工具有斧、鋸、鑽、刮刀及塑料薄膜等。段木栽培要掌握好砍口深淺,稍達木質部為宜,有利菌的生長,砍口或打孔後需立即接種,以保接種質量。

⑸ 為何叫蔡氏瓊脂培養基與察氏培養基有什麼區別

蔡氏培養基中按15-20g/L左右的量加入瓊脂糖,就是蔡氏瓊脂培養基了。以下是蔡氏瓊脂培養基具體情況:

用途:
用於培養能以硝酸鹽作為唯一氮源的真菌和細菌,及青黴和麴黴等黴菌的分離培養和形態鑒別(GB/T4789.28-2003,GB/T4789.16-2003中4.77)。

原 理:
硝酸鈉提供氮源;磷酸氫二鉀是緩沖劑;硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵提供必須的離子;蔗糖提供碳源;瓊脂是培養基的凝固劑。

配方(每升):
硝酸鈉 3g
磷酸氫二鉀 1g
硫酸鎂 0.5g
氯化鉀 0.5g
硫酸亞鐵 0.01g
蔗糖 30g
瓊脂 15g
最終pH 7.3±0.2

使用方法:
1、 稱取本品50g,加入蒸餾水或去離子水1 L,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌20min,待冷至55—60℃傾注滅菌平板;或將培養基溶解分裝三角瓶或試管,滅菌後倒平板或製成斜面。
2、 將純培養物點植於平板上。方法是將平板倒轉,向上接種一點或三點,每菌接種兩個平板,倒置於25—28℃溫箱中培養。當剛長出小菌落時,取出一個平皿,以無菌操作,用小刀將菌落連同培養基切下1cm×2cm的小塊,置菌落一側,繼續培養,於5—14d進行觀察。
3、 斜面觀察:將黴菌純培養物劃線接種(麴黴、青黴)或點種(鏈刀菌或其他菌)於斜面,培養5—14d,觀察菌落形態,同時還可以將菌種管置顯微鏡下用低倍鏡直接觀察孢子的形態和排列。

⑹ 改良察氏培養基配方謝謝

NaNO3 3g
K2HPO4 1g
KCI 0.5g
MgSO4 0.5g
FeSO4 0.01g
蔗糖 30g
瓊脂 15-20g
蒸餾水 1000ml
自然pH,蔗糖臨滅菌前加入,115℃,0.7㎏專/㎝2滅菌10分鍾屬。

⑺ 用察氏培養基、PDA培養基、YM培養基培養真菌,培養出的真菌最後斜面保存,保存用的培養基可以都是PDA嗎

可以的,PDA是真菌通用的培養基,絕大部分真菌真都OK

⑻ 高鹽察氏培養基

環凱高鹽察氏培養基用於飼料中黴菌的檢驗,貯存於避光、陰涼乾燥處,用後立即旋緊瓶蓋。

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