細胞凋亡用什麼儀器做
① 用流式細胞儀檢測細胞凋亡
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流式細胞術
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Image:03wiki-zn-frontpage-icon.gif流式細胞術正在翻譯。
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流式細胞術(英文flow cytometry)是一種生物學技術，用於對懸浮於流體中的微小顆粒進行計數和分選。這種技術可以用來對流過光學或電子檢測器的一個個細胞進行連續的多種參數分析。
目錄
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* 1 原理
* 2 流式細胞儀(flow cytometer)
* 3 應用
* 4 參見
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原理
一束單色光（通常是激光）照到流體力學聚焦的一股流體上。若干個檢測器瞄向流束和激光相交的這個點，其中一個和激光在同一直在線（稱作前散射(FSC)），其它幾個和激光垂直（旁散射(SSC)和一個或幾個熒光監測器）。當每個懸浮顆粒通過光束時會按某種方式把光散射，同時所帶有的熒光化合物被激發並發射出頻率低於激發光的熒光。這些散射光和熒光的組合數據被檢測器記錄，根據各檢測器亮度的波動（每個細胞會顯出一個散射或熒光的峰）就能夠推算出每個顆粒的物理和化學性質。前散射與細胞體積相關，而旁散射取決於顆粒的內部復雜程度（比如核的形狀、胞質內顆粒的種類或者末的粗糙程度）。
可以檢測的參數有：
* 細胞的體積和形態復雜程度
* 細胞中的色素
* DNA（細胞周期分析、細胞動力學、細胞增殖等）
* RNA
* 染色體分析和分選（文庫構建、染色體塗染）
* 蛋白質
* 細胞表面抗原（CD標記）
* 胞內抗原（各種細胞因子(cytokine)、次級媒介等）
* 核抗原
* 酶活性
* pH，胞內離子化的鈣、鎂，膜電勢
* 膜流動性
* 細胞凋亡(apoptosis)（定量檢測DNA降解、線粒體膜電位、通透性變化）
* 細胞存活能力
* 監測細胞電通透性
* 氧爆作用(oxidative burst)
* 研究癌細胞中的多重耐葯性(multi-drug resistance, MDR)
* 谷胱甘肽
* 各種組合（DNA/表面抗原等等）
這個列表非常長，而且在不斷地擴展。
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流式細胞儀(flow cytometer)
流式細胞儀又稱熒光激活細胞分選器、熒光活化細胞分類計（FACS，Fluorescence Activated Cell Sorter）。
現代的流式細胞儀每秒可以實時檢測幾千個顆粒，並且可以主動分離具有不同特性的顆粒。
流式細胞儀和顯微鏡比較像，但能夠對大量的單個細胞利用一組參數進行高通量的自動量化。固體組織需要在檢測前制備成單細胞的懸浮液。
一個流式細胞儀包括五個組成部分：
* 細胞流動系統：液流（鞘液(sheath fluid)）攜帶細胞，使顆粒以串流形式通過光束。
* 光源：有通常的燈（汞或氙）、高功率水冷的激光源（氬、氪、染料激光）、低功率氣冷激光（氬(488nm)，紅氦氖(633nm)，綠氦氖，氦鎘(紫外)）、偶極激光（藍、綠、紅、紫）。
* 檢測和模數轉換(analogue-to-digital conversion, ADC)系統：產生前散射、旁散射光和熒光的信號。
* 放大系統，線性或對數放大。
* 計算機，用於分析信號。
早期的流式細胞儀主要是實驗設備，但目前儀器和相關的試劑有了很廣的市場。不同廠商的儀器特性也不同，主要的廠商和品牌如下：
* Beckman-Coulter (ex-Coulter): Epics XL/XL-MCL; Epics Altra (Hypersort) (IBM-PC compatible platforms)
* Becton, Dickinson: (FACS's): FACSCAlibur, FACScan, FACSort, FASCSVantage (Mac OS platform) FACS Canto, LSRII, Aria, DiVa (PC PLatform)
* Cytomation: MoFlo, Cyan (IBM-PC platform)
* Partec/Dako: Galaxy; PAS; CCA; PA (IBM-PC compatible platforms)
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應用
流式細胞術在很多領域中都有應用，包括分子生物學、病理學、免疫學和海洋生物學等。在分子生物學中，它主要用於熒游標記的抗體。特異性的抗體與靶細胞上的抗原結合，能夠通過流式細胞儀研究這些細胞的特別信息。這在醫學（尤其是器官移植、血液學、腫瘤免疫學和化療、遺傳學）中具有很廣泛的應用。
現代的流式細胞儀具有多個激光和熒光檢測器（目前商業用儀器的記錄是4個激光和14個檢測器），可以用於多個抗體標記，以便在表現型中更准確地區別某個靶群體。
流式細胞儀也是很有用的分選儀器。當細胞/顆粒通過時，可以被選擇性地加上某種電荷，並在通過電磁場後偏轉，從不同出口流出。這樣就可以從一個混合物中高速（理論上可達到每秒大約9萬個細胞）准確地分離開四類細胞。
由流式細胞儀得到的數據可以畫成一維的柱狀圖或者二位或者三維的散點圖。
The data coming from flow-cytometers can be plotted in 1-D to proce histograms or seen in 2D as dot plots or in 3D with newer software. The regions on these plots can be sequentially separated by a series of subset extractions which are termed gates. Specific gating protocols exist for diagnostic and clinical purposes especially in relation to haematology. The plots are often made on logarithmic scales. Because of overlaping fluorescent dyes, emission spectrum generated interfering signals by detectors signals have to be compensated electronically.
海洋中主要的光合生物之一——占海洋浮游生物總細胞數將近1/3的原綠球藻(Prochlorococcus)就是通過流式細胞術發現的。因為其細胞小，葉綠素含量少，在通常的熒光觀察中被迅速漂白(bleach)，但由於在流式細胞術中細胞通過光束的時間極短，胞內葉綠素的熒光可被觀察到。
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參見
* 熒光顯微鏡
* 熒光活化細胞分選
取自"http://wikipedia.cnblog.org/wiki/%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%A1%93"
頁面分類: 待翻譯文章 | 細胞生物學 | 實驗室技術 | 解剖病理學 | 血液學 | 醫學檢驗
② 流式細胞儀檢測細胞凋亡的幾種方法的比較
目的:探索運用流式細胞儀來檢測細胞凋亡的方法.方法:採用流式細胞儀對DNA含量版、磷脂醯絲氨酸權、線粒體膜電位、鈣離子濃度的檢測,分析細胞凋亡情況.結果:DNA含量測定存在一定誤差;磷脂醯絲氨酸測定能准確反映細胞早晚期凋亡情況;線粒體膜電位、鈣離子濃度測定能准確反映凋亡細胞的生理指標,如果結合形態學分析將更為客觀.結論:通過比較實驗方法,為將來採用流式細胞儀檢測細胞凋亡提供更准確的實驗方法.
③ 細胞凋亡實驗，用哪些方法測凋亡
原理在細胞凋亡的過程中，基因組DNA會斷裂產生雙鏈、低分子量的DNA片段內和高分子量的DNA片段，容這些DNA鏈的缺口可以利用沒標記法來識別。試劑盒就是通過催化DNA斷端，來標記缺口。酶底物顯色後，可以光鏡檢查被染色的細胞。方法TUNEL試劑盒
④ 細胞凋亡最常用的方法檢測方法有哪些
一、形態學觀察方法二、DNA凝膠電泳三、酶聯免疫吸附法四、流式細胞儀定量分析
⑤ 檢測細胞凋亡的三種常用方法，您知道幾種
一、形態學觀察方法
二、DNA凝膠電泳
三、酶聯免疫吸附法
四、流式細胞儀定量分析
⑥ 求細胞凋亡的一些系統的檢測方法，最好全！謝了！
Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒
產品說明：
凋亡是一種程序性的細胞死亡，與細胞的壞死有生化和形態等方面的不同。磷酯醯 絲氨酸(phosphatidylserine, PS)是細胞膜的一種組成成分，在正常細胞主要分布在細胞膜內側；細胞發生凋亡的早期，PS會外翻到細胞表面，即細胞膜外側。Annexin V 對PS有高度的親和力，可以選擇性結合和標記PS 。本試劑盒採用重組人Annexin V-EGFP融合蛋白，來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的PS，標識出凋亡細胞。由於壞死細胞和凋亡晚期細胞，其膜內側的PS也可以被Annexin V結合，通常用另一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)進行雙重染色，以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡晚期的細胞。用Annexin V-EGFP和PI染色後，正常的活細胞不被Annexin V-EGFP和PI著色；凋亡早期的細胞僅被Annexin V-EGFP著色，PI 染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被Annexin V-EGFP和PI著色。用流式細胞儀或熒光顯微鏡直接觀察PS外翻這一細胞凋亡的重要特徵，是一種快速簡便的細胞凋亡經典檢方法。
操作方法：
染色液的配製：
1) 取適量4x Annexin V結合液，用雙蒸水稀釋至1xAnnexin V結合液。後續工作均使用1x Annexin V結合液。
2) 將20 μl Annexin V-EGFP加入1 ml Annexin V結合緩沖液中，即配成10次測試的 Annexin V染色液。
3) 將5 μl PI加入5 ml Annexin V結合緩沖液中，即配成10次測試的PI染色液。
熒光顯微照相操作方法：
1) 培養細胞用所需方法處理以誘導凋亡。應同時設置陰性對照。
2) 對貼壁生長細胞，離心收取培養液內的懸浮細胞，並用胰酶消化貼壁細胞，合並兩部分細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用冰冷PBS洗滌細胞後， 1000g離心5 min，棄上清，加入100 μl Annexin V染色液輕輕重懸細胞。室溫(20-25℃)放置，孵育10~15 min。再加入PI染色液0.5 ml混勻。室溫孵育5 min
3) 完成孵育後，1000g離心5 min，棄上清，輕輕重懸細胞於50~100μl Annexin V結合緩沖液中；取25-50μl細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
4) 熒光顯微鏡下，用藍光激發，觀察和拍攝細胞紅色發射圖像。結合Annexin V-EGFP 的凋亡細胞的質膜將顯示綠色光圈；膜結構不完整的壞死細胞和晚期凋亡細胞在整個核區被PI染成紅色而質膜為Annexin V-EGFP陽性呈現為綠色光圈。
5) 培養於48孔板或96孔板內的貼壁細胞，也可進行原位染色。在凋亡誘導結束後，用冰冷PBS輕輕洗滌細胞，完全去除PBS，加入100 μl Annexin V染色液，室溫孵育 10~15 min；吸除染色液，加入PI染色液0.5 ml混勻。室溫孵育5 min。立即在倒置熒光顯微鏡下觀察。
流式細胞分析操作方法：
1) 培養細胞用所需方法處理以誘導凋亡。應同時設置陰性對照。
2) 對貼壁生長細胞，用胰酶消化制備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用冰冷PBS洗滌細胞後，取5~10萬重懸的細胞，1000g離心5 min，棄上清，加入100 μl Annexin V染色液輕輕重懸細胞。室溫(20-25℃)放置，孵育10~15 min。
3) 再加入PI染色液0.5 ml混勻。室溫孵育5 min。
4) 完成孵育後，立即進行流式細胞分析。採用488 nm雙波長激發，測定~510 nm和>575 nm的發射，細胞應可分成三個亞群：活細胞僅有很低的熒光強度，凋亡細胞有較強的綠色熒光，壞死細胞（包括極晚期凋亡細胞）有綠色和紅色熒光雙重染色。
注意事項：
1) 該試劑盒只能檢測活細胞，而不能用於切片、擦刮、固定或浸潤細胞樣品的檢 測。如需對活細胞固定進行其它檢測，可在本試劑盒標記完成後，用Annexin V結合緩沖液清洗細胞，再固定進行後續操作。
2) 細胞凋亡是一種持續變化的動態過程，選擇合適的誘導時間對觀察凋亡比較重要。
3) Annexin V和PI染色的活細胞應盡快檢測。
4) 微生物污染的細胞樣品或試劑可導致錯誤的觀察結果。
⑦ 細胞凋亡的早期檢測方法有哪些
1、PS（磷脂醯絲氨酸）在胞外膜分布的檢測
PS從胞膜內側轉移到外側現象是在細胞凋亡的早期即可發生標志。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白，能專一性的結合暴露在胞膜外側的PS，使用熒光素標記的AnnexinV 蛋白（如Annexin V-FITC）即可檢測細胞凋亡。由於這是一種凋亡早期的活細胞檢測（懸浮細胞和貼壁細胞都適用），可與DNA染料或別的晚期檢測方法相結合來標記凋亡的發展階段。操作簡便快速，10分鍾就可完成檢測。靈敏度高，可作為流式方法分析凋亡細胞的基礎。
2、細胞內氧化還原狀態改變的檢測
正常狀態下,谷胱甘肽（GSH）作為細胞內的一種重要的氧化還原緩沖劑。細胞內有毒的氧化物通過被GSH還原而清除，氧化型的GSH又可被GSH還原酶迅速還原。這一反應在線粒體中尤為重要，許多呼吸作用中副產物的氧化損傷將由此被消化除。在細胞膜中有可被凋亡信號啟動的ATP依賴的GSH轉移系統。當細胞內GSH的排除非常活躍時，細胞液就由還原環境轉為氧化環境，這可能導致了凋亡早期細胞線粒體膜電位的降低，從而使細胞色素C（三羧酸循環中的重要組分）從線粒體內轉移到細胞液中，啟動凋亡效應器caspase的級聯反應。
3、細胞色素C的檢測
細胞色素C作為一種信號物質，在細胞凋亡中發揮著重要的作用。正常情況下，它存在於線粒體內膜和外膜之間的腔中，而不存在於胞漿內。凋亡信號刺激後可使其從線粒體釋放到胞漿中，結合Apaf-1後而啟動caspase級聯活化反應，首先可激活caspase-9，後者再激活caspase-3和下游的其它caspase分子。凋亡發生的早期，細胞色素C泄漏到胞漿中，檢測胞漿中細胞色素c的含量可反映細胞的早期凋亡。
4、線粒體膜電位變化的檢測
在細胞凋亡的早期，線粒體在形態學上沒有明顯變化。但線粒體可發生很多生理生化的改變。例如在受到凋亡誘導後，線粒體的轉膜電位發生變化，導致膜穿透性改變。MitoSensorTM是一種陽離子染色劑，對此膜電位改變非常敏感，可呈現出不同的熒光染色。正常細胞中，它在線粒體中形成聚集體，發出強烈的紅色熒光。凋亡細胞中，因線粒體跨膜電位改變，它則以單體形式停留於胞漿中，發出綠色熒光。用熒光顯微鏡或流式細胞儀可清楚地分辨這兩種不同的熒光信號。
⑧ 細胞凋亡檢測方法有哪些
細胞凋亡的形態學檢測
1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體.
貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落.
(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態.
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況.
常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三種種染料與DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T鹼基區.紫外光激發時發射明亮的藍色熒光.
Hoechst是與DNA特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋,終濃度為10 ug/ml.
DAPI為半通透性,用於常規固定細胞的染色.儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為10 ug/ml.
結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現濃縮狀態;Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體(圖1).
3 透射電子顯微鏡觀察
結果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質濃縮.凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內染色質高度盤繞,出現許多稱為氣穴現象(cavitations)的空泡結構(圖2);Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體.
⑨ 請問流式細胞儀檢測細胞凋亡的原理是什麼
一、原理
在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸（）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂醯絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V進行熒光素（EGFP、FITC）標記，以標記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。
二、注意事項
1、必須活細胞檢測，不能用能破壞細胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
2、特殊細胞的染色方法：在消化或吹打時，有些細胞（如神經元細胞）很容易受到損傷，導致晚期凋亡或壞死比例非常高，不能反映真實結果。實驗的解決方法：先低速離心，吸取細胞培養板中的液體，留少許液體，加入適量PI和Annexin-V染色10min後，將漂浮細胞吸至離心管中，離心洗滌兩次，用PBS漂洗貼壁細胞兩次，加胰酶消化後將細胞懸液移至另一離心管中，離心洗滌，再與漂浮細胞合並後上流式細胞儀檢測。應用該法可降低晚期凋亡和壞死比例，增加早期凋亡細胞比例。
3、由於Annexin-V為鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，只有在鈣離子存在的情況下與PS的親和力才大，因而在消化細胞時，建議一般不採用含EDTA的消化液。
4、必須設置陰性對照和補償對照（分別單染）。
⑩ 怎樣利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
PI 單染並不是很好的看凋亡的方法。一般可以作為早期的篩選實驗，因版為特異性不好
方法和做細胞周權期是一樣的，你可以查一下做細胞周期的實驗方法，我這里就不貼了。
幾點注意：
一定要設置單細胞gate，以防多聚細胞核雜質的干擾
RNA酶不要忘記了
固定時間半小時足以，千萬不要在酒精中過夜，不然會產生大量碎片