PCR儀器得到的是什麼

⑴ PCR的原理是什麼 的原理是什麼，它有什麼用途

四、影響PCR特異性的因素
通過上述內容。可以看出有許多因素可以影響PCR的特異性，在此我們作一歸納，供大家參考：①退火步驟的嚴格性：提高退火溫度可以減少不匹配的雜交，從而提高特異性。②減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發及錯誤延伸。③引物二聚體是最常見的副產品，降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發，尤其是引物的二聚化。④改變MgCl2(有時KCl)濃度可以改進特異性，這可能是提高反應嚴格性或者對Taq酶的直接作用。⑤模板中如果存在次級結構，例如待擴增的片段易自行形成發夾結構時，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加入7-脫氮-2』-脫氧鳥苷-5』-三磷酸（7-deaza-2』-deoxyguanosine-5』-trihosphate）(de7GTP)。用de7GTP與dGTP比例為3：1的混合物（150μmol/l de7GTP +50μmol/L dGTP）代替200μmol/l dGTP，則可阻非特異性產物的生成。
五、擴增平坡
擴增反應並不是可以無窮地進行下去的，經過一定的循環周期後需擴增的片段不再按指數增多而逐漸進入平坡；進入平坡的循環次數，取決於起始時存在的模板拷貝數以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環的後期，合成產物達0.3～1pmol時，由於產物的堆積，使原來以指數增加的速率變成平坦的曲線。
造成PCR進入平坡的原因有：引物和dNTP等消耗完畢、Taq酶失活，這幾中因素在標准反應中均不會出現。此外，還有幾種可能：
1．底物過剩因DNA合成量多於反應液中存在的Taq酶，在100μl反應液中含2.5Utaq酶而DNA合成量達1μg（3nmol脫氧核苷酸）時，開始變為底物過剩。延長延伸時間或添加Taq酶，可以克服之。但不實用，因每進行下一循環就要延長延伸時間一倍及多加一倍Taq酶，才能繼續保持指數增長。
2．非特異性擴增產物的競爭與上述情況密切相關，此時不需要的DNA片段與需要的片段同時競爭聚合酶，要克服這一情況是要提高反應特異性，使不需要片段不能大量積聚。
3．退火時產物的單鏈自己締合兩條單鏈的DNA片段在退火時除了與引物締合外，也可以自行締合，這也會阻止產品增多。當產物濃度到達10pmol/100μl時即可發生此現象，除稀釋外無法克服。
4．變性在高濃度產物條件下，產物解鏈不完全，以及最終產物的阻化作用（焦磷酸化，雙鏈DNA）。
總而言之，PCR的條件是隨系統的而異的，並無統一的最佳條件，先選用通用的條件擴增，然後稍稍改變各參數，可以達到優化，以取得優良的特異性和產率。

⑵ pcr儀是干什麼的

用聚合酶鏈式反應擴增所需DNA片段

⑶ PCR儀工作原理

聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction ,簡稱PCR）是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。 它具有特異、敏感、產率高、 快速、 簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。 二、PCR基本原理 基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性－－退火－－延伸三個基本反應步驟構成： 1、模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備； 2、模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合； 3、引物的延伸：DNA模板－－引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性－－退火－－延伸三過程，就可獲得更多的「半保留復制鏈」，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍（Plateau）。到達平台期所需循環次數取決於樣品中模板的拷貝。 在此同時認識到蛋白質是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態學和分離的亞細胞組分實驗中已發現微粒體（microsome）是細胞內蛋白質合成的部位；1957年Hoagland、Zamecnik及Stephenson等分離出tRNA並對它們在合成蛋白質中轉運氨基酸的功能提出了假設；1961年Brenner及Gross等觀察了在蛋白質合成過程中mRNA與核糖體的結合；1965年Holley首次測出了酵母丙氨酸tRNA的一級結構；特別是在60年代Nirenberg、Ochoa以及Khorana等幾組科學家的共同努力破譯了RNA上編碼合成蛋白質的遺傳密碼，隨後研究表明這套遺傳密碼在生物界具有通用性，從而認識了蛋白質翻譯合成的基本過程。 從分子生物學的發展過程，可以看到在近半個世紀中它是生命科學范圍發展最為迅速的一個前沿領域，推動著整個生命科學的發展。至今分子生物學仍在迅速發展中，新成果、新技術不斷涌現，但分子生物學的歷史還短，積累的資料還不夠。例如：在地球上千姿萬態的生物攜帶龐大的生命信息，迄今人類所了解的只是極少的一部分，還未認識核酸、蛋白質組成生命的許多基本規律；又如即使到2005年我們已經獲得人類基因組DNA3×109bp的全序列，確定了人的5-10萬個基因的一級結構，但是要徹底搞清楚這些基因產物的功能、調控、基因間的相互關系和協調，要理解80%以上不為蛋白質編碼的序列的作用等等，都還要經歷漫長的研究道路。可以說分子生物學的發展前景光輝燦爛，道路還會艱難曲折。 平或放大真核細胞單拷貝基因，通過PCR方法都是不難完成的。 4、特異性強 作為引物的寡核苷酸與模板結合的正確性是決定反應產物是否特異的關鍵。 5、對原始材料質量要求低含微量（pg,ng）的目的DNA的粗製品或者總RNA，就可以用做反應起始材料來獲取目的產物。 主要適用於生命科學、醫學、農業科學、環境科學、考古學及歷史事件解讀和衛生安全方面。

⑷ PCR的原理是什麼，它有什麼用途

PCR的原理是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。

PCR最有價值的應用領域就是對感染疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。

在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。

但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。

(4)PCR儀器得到的是什麼擴展閱讀

標準的PCR過程分為三步：

1、DNA變性：（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

2、退火：（60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。

3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。

有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度。

⑸ PCR儀的內部構造及工作原理是什麼

頂樓上，就是一個升溫降溫的機子。升降溫速度越快，性能越好。

PCR的工作原理是變性 退火 延伸 三個步驟，這三步需要不同的溫度，而PCR儀就是能達到這樣目的的一個裝置

⑹ 我問下PCR儀上顯示的這個是什麼意思啊

這些程序的意思是：
94°C 3min （預變性）94°C 30s （變性）52°C 30s （退火）72°C 30s （延伸）
GOTO 2 ,是指第一次完成到72°C之後,接下來回回到第二步,30個循環答.
最後72°C 1min.HOLD 10°C,是指PCR完成之後,如果你沒有及時把東西拿出來,儀器會保持在10°C,是對產物的一種保護.

⑺ PCR儀器怎麼用

回答即可得2分，回答被採納則獲得懸賞分以及獎勵20分 PCR 儀480使用標准操作流程
發布時間：2007-8-9 瀏覽次數：153次
原理：聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的診斷中具有重要的價值。在PCR擴增過程中，擴增的DNA產量是呈指數上升的，經過n個循環的擴增，一個DNA分子的產量便達到2n個拷貝。PCR產物一般為1013拷貝/ml，取0.1ml即為109拷貝，而1mg人基因組DNA才含1.4´106拷貝的單拷貝基因片段，因此使得PCR擴增反應具有強大的擴增能力，提高了檢測的敏感性。此外，利用PCR反應，還能夠對感染因子實施定量分析，實時監測其在宿主體內的動態變化，有利於指導臨床診療。

主體內容（操作步驟，必填項目）：
開啟PCR儀電源至ON 位置；屏幕顯示版本信息後，出現step to edit file# 3.
SOAK file# 1的編輯：
file# 1是在某一溫度下持續無限長時間，即只可修改溫度。按 file →1→Enter鍵；顯示SOAK temperature （0-100） 25℃；可根據實驗需要修改溫度，如要30℃，按3，0，再按Enter鍵，顯示End of file，RUN-STORE-PRINT, 按NO，使游標至store 的下方，按Enter 或yes鍵顯示：File store Enter user# 選擇自己的數碼代號，按數字鍵盤後，按Enter鍵，顯示: file store Enter file#選擇空白程序號，按數字鍵盤，按Enter鍵，顯示 Yes to store User # ××× file # ××× 按yes鍵，此號即為用戶存儲程序。
Time delay File # 2 的編輯：
Time delay file #是在某一溫度下保溫有限時間，按 file →2→Enter鍵，顯示：Time delay File Step to edit file # 2 按step 鍵，顯示 delay time (0-999) 7 min 0 sec 按要求修改後按enter鍵，調好min, sec後，顯示beep while delay? NO- YES, 按NO→Enter，顯示 link to a stored file, 若無需連接，按0→Enter, 按NO，讓游標停留在store 下方，按Enter, 按自己的數碼代號，按Enter, 按程序代號，按 yes (yes to store)。
File # 3 的編輯：
File # 3是溫度循環，溫度上升和下降比File # 4慢，編此程序大致同File # 4。
File # 4的編輯：
File # 4是程序循環，溫度上升和下降快。按File → 4→Enter,顯示 step- cycle file Step to edit File # 4, 按step, 顯示：seg1 target temperature 94℃，如需修改則按數字鍵後，按enter, 否則直接按enter, 顯示：seg1 segment time （0-999）1 min 0 sec 修改好min, sec 後，按enter,顯示：seg2 target temperature 37℃ 溫度時間修改方法同上，完成後按enter, 顯示：seg3 target temp 72℃, 溫度時間修改同上，seg 4 全部按0, 按 enter,顯示：auto seg extension NO- YES, 按NO，顯示：auto seg extension，NO- YES，
按enter(step/yes) 回答 yes, 顯示： extension per cycle （0-59）1 如果每個循環是延長1 sec, 按enter, 否則修改後按enter 鍵，顯示：cycle count （1-99）25，修改後， 按 enter 鍵，顯示 link to store file (0-99, 0= shut off) 0，若不與其它程序連接則按0，enter. 若與其它程序連接則按程序號，按enter, end of file RUN –STORE-PRINT 按NO，游標至 STORE 下方，按ENTER，顯示： file store enter file # 按程序代碼，按enter, 顯示 yes to store User # ××× file # ×××按YES.

清除程序
按 file →所要清除的程序號→enter, 按file →clear, 顯示 file # ×× deleted, enter new file #, 這樣你所需要清除的程序被清楚，這一空白程序則可編入新程序。

引用文獻：
本研究所操作規程和網上搜索

⑻ pcr儀的用途是啥子

polymerase chain reaction (PCR)
PCR技術類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成

⑼ 實時熒光PCR儀器的原理

實時熒光定量pcr儀器怎麼用的
用已知濃度的dna樣本（通常是質粒）梯度內稀釋成一系列的樣本。容做實驗的時候，這些標准品和待測樣本加在同樣一塊96孔盤的不同孔內。一起做pcr。
標准品的熒光強度和已知的濃度作圖，可以得到一條標准曲線。而待測樣本的熒光強度測出以後，就可以在標准曲線上算出樣本濃度了。

⑽ PCR儀的獲得諾貝爾獎的PCR技術

1993年，美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎，他所取得的成就是發明了PCR技術。
PCR，中文譯為聚合酶鏈式反應，其實是一種DNA的快速擴增技術，其擴增效率之高就象核裂變的「鏈式反應」那樣。PCR技術通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用，可以在3個小時內把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術一問世，立刻引起了分子生物學研究的一場革命，人們利用這種轟動全世界的技術很快就把微觀領域的生物學研究大大地往前推了一步。可以這么說，PCR技術使分子生物學研究一下子獲得了突破，而且隨著PCR技術的日趨完善，PCR在人類社會生活中的應用也越來越廣泛。比如說在「DNA指紋」中我們提到，科學家們只需要一根頭發甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作，這里實際上就要採用PCR技術，因為一個細胞中的DNA含量實在太少了，人們根本不可能檢測到它的指紋；有了PCR技術就好辦了，通過PCR技術把這個細胞中的DNA片斷擴增1000萬倍，這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如，在醫院里檢驗血液中的某種病毒，有時病毒量極少（例如有的艾滋病病毒攜帶者），通過傳統的檢查方法費力又費時，這時PCR技術也許就可以幫上忙。可以先選定這種病毒DNA上的一段DNA，設計合適的引物DNA，然後通過PCR技術一擴增很快就可以判斷出血樣中是否擴增出了大量的DNA，如果是的話，那麼就說明血樣中帶有該種病毒了。PCR方法不但有極高的靈敏度，而且可以同時一次做近百個擴增反應，省時省力效率高。
PCR技術神奇就神奇在以下幾個特點上：一是被擴增的DNA所需量極小，理論上講一個分子就可以用於擴增了；二是擴增效率高，目的基因的量成指數形式擴增，幾個小時就擴增1000萬倍以上。現在PCR技術已經被廣泛地應用於生命科學研究、食品衛生、醫療、法醫及環境監測等諸多方面，真不愧是「獲得諾貝爾獎」的好技術！