酶的切割位点如何描述
『壹』 高中生物问题 限制酶的切割位点一定在识别序列内部 这句话正确吗
不正确,可以再识别序列的外边缘
如GGTT↓
CCAAG
第一句对,因为酶具有特异性
第二句对,因为粘性末端决定于限制酶怎么切,不同的酶可以切出相同的末端,只是这末端所在的序列不一样
第三句错,还可以有平末端
『贰』 质粒上有多个限制酶的切割位点,这句话怎么理解
意思很明确啊 人为的插入了很多酶切位点
『叁』 RNA聚合酶的切割位点在哪
RNA 聚合酶没有切割位点
限制酶有切割位点,在磷酸二酯键
『肆』 smal限制酶切割位点
(1)质粒上含有两个SmaⅠ限制酶的切割位点,所以用SmaⅠ限制酶处理图甲所示的质粒会得到2个DNA片段;图乙所示的外源DNA含有一个AluⅠ限制酶的切割位点,所以用AluⅠ处理外源DNA会形成两个黏性末端,增加2个游离的磷酸基团.
(2)外源DNA含有四个酶切位点,即SmaⅠ、AluⅠ、PstⅠ和HindⅢ酶,其中AluⅠ酶的切割位点位于目的基因上,所以不能用此酶切割;用SmaⅠ酶切割会将质粒上两个标记基因均破坏,所以不能用SmaⅠ酶切割;应选用 PstⅠ和HindⅢ酶同时酶切质粒和含目的基因的外源DNA,这样可以避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接,也便于筛选需要.如果是用PCR技术扩增目的基因,设计引物是关键,但在扩增时退火温度一般为55~60℃,对于(A+T)%>50%,一般用55℃;(A+T)%≤50%时一般用60℃,原因是G与C之间是三个氢键,所以C和G比例越高,DNA越稳定.
(3)用 PstⅠ和HindⅢ酶同时酶切质粒,会破坏氨苄青霉素抗性基因,但没有破坏四环素抗性基因,所以导入重组质粒的大肠杆菌能抗四环素,但不能抗癌变青霉素.为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌,首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含四环素的培养基中,然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含氯霉素培养基上,以筛选获得含重组质粒的细菌.在含四环素培养基中能生长繁殖,而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖的是导入了重组质粒的大肠杆菌.
(4)因为大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体,不能对多肽链进行折叠、组装与修饰,所以在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中,目的基因正常转录形成了mRNA,但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性.
故答案为:
(1)22
(2)PstⅠ和HindⅢ酶G与C(之间是三个氢键)比例越高越稳定
(3)四环素氯霉素重组质粒(或目的基因)
(4)大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体(或大肠杆菌缺乏生物膜系统),不能对多肽链进行折叠、组装与修饰
『伍』 如何确定酶切位点
酶切位点是在引物上加入的。注意添加酶切位点的时候要在引物5'端加入,3'端要保证至少12个碱基的完全配对区域。
『陆』 怎么分析酶切位点
酶切位点(Restriction Enzyme cutting site):DNA上一段碱基的特定序列,限制性内切酶能够识别出这个序列并在此将DNA序列切专成两属段。
可能存在同尾酶,不同酶的识别序列不同,
有的可能能识别多个酶切位点比如STY1识别序列有WW
『柒』 什么叫限制酶切割位点
基因工程中的构建基因表达载体需用到限制酶和DNA连接酶,限制酶会内识别限制酶切容割位点(即某个DNA序列,如AACC--TTGG,当然,不同的限制酶作用位点不一),限制酶能将磷酸二酯键切断,不是随便切断,而是特定的。
『捌』 如何给一段序列增加一个酶切位点。
你可以设计带有酶切位点的引物,对目的基因进行PCR,就可在目的基因上引入酶切专位点。
步骤:引属物设计(借助软件)——合成引物(公司合成)——PCR。
最重要的一个仪器就是PCR仪了,具体的加什么试剂,加多少,我想楼主应该是做分子生物学,这些应该挺清楚的了。
楼主,引物一般是用软件设计,例如Primer.5,你根据你的目的基因两端的特点,设计合适的引物,然后在引物上再添加酶切位点
,例如EcoRⅠ
是应用最广泛的限制性内切酶,酶切位点和切割位点如下:
5'
G↓AATTC
3'
3'
CTTAA↑G
5'
,你就可以在这两条引物上分别添加这几个脱氧核苷酸,这不就在引物中引入酶切位点了吗?经过PCR后引物和目的基因连在一起,酶切位点自然也连上去了。楼主,你可以根据需要,引入不同的限制性内切酶的酶切位点。
『玖』 不同限制酶切割dna的位点不同
AC、一种限制酶能识别一种特定的核苷酸序列,并能在特殊位点切割DNA分子,专A正确,C错误,D正确;
B、同一种限属制酶切割不同的DNA产生的黏性末端相同,能够很好地进行碱基配对,B正确.
故选:C.
『拾』 如何查找酶切位点
用这个吧:
http://www.bio-soft.net/sms/index.html