限制性核酸内切酶可对什么进行切割
1. 限制性核酸内切酶是怎样切割DNA的
不可以
限制性核酸内切酶是识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。它能识别内双链分子的某种特定核苷酸容序列,使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,而且只能切割dna,不能切割rna。另外,根据酶的专一性也能得出答案
2. 限制性内切酶能切割DNA单链吗
1. 有少数限制性内切酶能切割DNA单链,效率满低的。
2. 在末端加一些ggcc的和单双链没有关系,个人觉得和酶与DNA识别binding的结构有关。
3. 限制性核酸内切酶到底能切割什么,什么是限制性
不可抄以
限制性核酸内切酶是识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。它能识别双链分子的某种特定核苷酸序列,使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,而且只能切割dna,不能切割rna。另外,根据酶的专一性也能得出答案
4. 限制性内切酶可切割RNA吗为什么
限制性内切酶的全名叫 限制性核酸内切酶……既然是核酸,就包括DNA和RNA了,酶内的专一性有三种容,一个是底物专一性,一个是化学键专一性,一个是构象还是什么玩意儿的专一性。不一定是只能催化严格意义上的一个反应的。
RNA一般是单链,用具有切割活性的一种RNA聚合酶来切割(就是tDNA转录出来mRNA,要经过切割形成tRNA,这些都在核内进行),双链RNA也是存在的,介导RNA干扰现象。不需要RNA干扰的时候,双链RNA肯定也要降解的。降解也需要酶……tRNA的二级结构里也有双链的RNA片段。tRNA降解的时候肯定也要用到一些酶。它们也许不叫限制性内切酶。
总之LZ如果是高中生,遇到这种题就可以答限制性内切酶不可以切割RNA,为什么?因为它是限制性内切酶……酶有专一性……而且高中时候学的限制酶就是基因工程切DNA的东西。这个这个……高中时候书上就是那样写的,照样答就行了。
5. 限制性核酸内切酶切割DNA双链后,可产生哪些切口,各有何特点
一个酶切可以产生平末端和粘性末端两种,平末端连接起来较苦难,最好需要去磷酸化,防止自连,粘性末端连接比较简单,效率更加高,连接目的片段方向固定!
6. 限制性核酸内切酶只能切割DNA不能切割RNA吗
不可以
限制性核酸内切酶是识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶回。它能识别双链答分子的某种特定核苷酸序列,使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,而且只能切割DNA,不能切割RNA。另外,根据酶的专一性也能得出答案
7. 限制性核酸内切酶的切割位点和识别位点的区别
1、位置:
一条单链DNA上可能有多个识别位点,但一个识别位点只有一个酶切位点。
2、对称性:
限制酶的识别位点大多数为回文对称结构,切割位点在 DNA 两条链一定是相对称的位置。
3、识别碱基个数:
限制酶识别位点的长度一般为 4-8 个碱基,切割位点只是识别两个碱基
(7)限制性核酸内切酶可对什么进行切割扩展阅读:
1、限制性核酸内切酶三种类型:
(1)第一型限制酶:
同时具有修饰及识别切割的作用;另有识别DNA上特定碱基序列的能力,通常其切割位距离识别位可达数千个碱基之远。例如:EcoB、EcoK。
(2)第二型限制酶:
只具有识别切割的作用,修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文序列;所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗传工程上,实用性较高的限制酶种类。例如:EcoRI、HindⅢ。
(3)第三型限制酶:
与第一型限制酶类似,同时具有修饰及识别切割的作用。可识别短的不对称序列,切割位与识别序列约距24-26个碱基对。例如:HinfⅢ。
2、限制性核酸内切酶生理意义:
(1)实际就是限制酶降解外源DNA,维护宿主遗传稳定的保护机制。
(2)甲基化是常见的修饰作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。
(3)能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌,其自身的基因组中可能有该酶识别的序列,只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。
(4)不是说一旦甲基化了,所有限制酶都不能切割。大多数限制酶对DNA甲基化敏感,因此当限制酶目标序列与甲基化位点重叠时,对酶切的影响有3种可能,即不影响、部分影响、完全阻止。
(5)对甲基化DNA的切割能力是限制酶内在和不可预测的特性,因此,为有效的切割DNA,必须同时考虑DNA甲基化和限制酶对该类型甲基化的敏感性。
(6)另外,大部分商业限制酶如今专门用于切割甲基化DNA。
8. 限制性核酸内切酶切割的原理和方法
以DNA限制性核酸内切酶为例
1DNA限制性内切酶相关简介编辑
生物体内能识别并切割特异的双链序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶(简称限制酶)。
2DNA限制性内切酶酶切原理编辑
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:
Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。
Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性末端,如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。
示意图:
5'…G↓AATTC…3' →5'… G AATTC…3'
3'…CTTAA↑G …5' →3'… CTTAA G…5'
3影响因素编辑
影响条件
DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。
处理方法
当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时,会影响其进一步使用,因此在吸取限制性内切酶时,每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶,必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。
若两者可用同一缓冲液,则可同时水解。
若需要不同的盐浓度,则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用,随后调节盐浓度,再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第一个酶切反应完成后,用等体积酚/氯仿抽提,加0.1倍体积3mol/L NaAc和2倍体积无水乙醇,混匀后置-70℃低温冰箱30分钟,离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
4DNA限制性内切酶酶切图谱编辑
图谱简介
DNA限制性内切酶酶切图谱,又称DNA的物理图谱,它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成,以直线或环状图式表示。在DNA序列分析、基因组的功能图谱绘制、DNA的无性繁殖、基因文库的构建等工作中,建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节,近年来发展起来的RFLP(限制性片段长度多态性)技术更是建立在它的基础上。
构建方法
构建DNA限制性内切酶图谱有许多方法。通常结合使用多种限制性内切酶,通过综合分析多种酶单切及不同组合的多种酶同时切所得到的限制性片段大小来确定各种酶的酶切位点及其相对位置。酶切图谱的使用价值依赖于它的准确性和精确程度。
制作过程
在酶切图谱制作过程中,为了获得条带清晰的电泳图谱,一般DNA用量约为0.5-1μg。限制性内切酶的酶解反应最适条件各不相同,各种酶有其相应的酶切缓冲液和最适反应温度(大多数为37℃)。对质粒DNA酶切反应而言,限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶,消化1-2小时。但要完全酶解则必须增加酶的用量,一般增加2-3倍,甚至更多,反应时间也要适当延长。希望能帮到你O(∩_∩)O哈哈~
9. 限制性核酸内切酶的切割
5指的是磷酸基团,3指的是羟基。碱基与碱基之间形成氢键,解旋酶和高温加热会打开。DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’,5’-磷酸二酯键相连构成的长链。
限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶,简称限制酶。切割部位就是图上的红色线划定的CUT之间的磷酸二 酯键。